人表皮生長(zhǎng)因子受體2（Her2/neu）檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明:

?檢驗(yàn)方法

（1）樣品稀釋：待檢樣品（血清）先用稀釋液作5倍稀釋（50?μL樣品+200?μL?稀釋液），如果有樣品檢測(cè)超過線性上限，可繼續(xù)做20倍或以上稀釋。（如果需要測(cè)定質(zhì)控品，作5倍稀釋）。

（2）確定所需孔數(shù)：空白對(duì)照、校準(zhǔn)品、樣品、質(zhì)控品均需設(shè)2重復(fù)孔。移除多余孔條密封保存于2-8?℃。

（3）在酶標(biāo)板孔中分別加入（請(qǐng)做好加樣的順序標(biāo)記和記錄）：

校準(zhǔn)品孔：從7個(gè)校準(zhǔn)品管里，各取100?μL，按照濃度由低至高的順序?qū)⑿?zhǔn)品加入酶標(biāo)板中，每個(gè)濃度要更換新的吸頭，并做2個(gè)重復(fù)孔。

樣品孔：加入稀釋后的樣品100?μL，并做2個(gè)重復(fù)孔。

空白對(duì)照孔：加入空白對(duì)照100?μL，并做2個(gè)重復(fù)孔。

質(zhì)控品孔(客戶選定位置)：加入5倍稀釋的質(zhì)控品100?μL，并做2個(gè)重復(fù)孔。

加樣圖：（僅供參考，用戶可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整）

圖1.?48測(cè)試/盒加樣圖舉例

圖1.?96測(cè)試/盒加樣圖舉例

（4）在上述（3）的各孔中每孔加入已稀釋的酶標(biāo)抗體50?μL（以稀釋液稀釋50倍）。

（5）孵育：用封板膜覆蓋酶標(biāo)板，震蕩20-30?s，混勻其中液體，室溫（20-26?℃）孵育2?h。?有條件時(shí)可在轉(zhuǎn)速為100?rpm的水平搖床上進(jìn)行。

（6）洗滌：除去孔內(nèi)液體，用1×洗滌液洗板3次，每次3-5?min，300?μL/孔，最后在干凈的吸水紙上拍干。

（7）顯色：加入顯色液，100?μL/孔。室溫（20-26?℃）避光，20?min。

（8）終止：加入終止液，100?μL/孔（加入終止液的時(shí)間點(diǎn)可參考最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品，當(dāng)其呈現(xiàn)深藍(lán)色時(shí)即可終止）。

（9）讀數(shù)：立即用酶聯(lián)免疫測(cè)定儀在波長(zhǎng)450?nm條件下測(cè)定各孔的OD值（或在4?℃保存1?h內(nèi)測(cè)定，以630?nm作為參考波長(zhǎng)）。

（10）計(jì)算：將校準(zhǔn)品吸光度OD值作為橫坐標(biāo)（X），相應(yīng)的校準(zhǔn)品濃度作為縱坐標(biāo)（Y），得到相應(yīng)的校準(zhǔn)曲線y=ax3+bx2+c（不通過零點(diǎn)）。將樣品OD值（X）由校準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度（Y），再乘以樣品的稀釋倍數(shù)，即可得到所測(cè)樣品的Her2濃度。

（11）質(zhì)控品：建議每次測(cè)試進(jìn)行質(zhì)控。如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，提示檢測(cè)結(jié)果不可靠，不應(yīng)出具檢測(cè)報(bào)告。應(yīng)進(jìn)行分析和查找原因，實(shí)施改進(jìn)并保留記錄。

【參考值（參考范圍）】

0-15?ng/mL。超過15?ng/mL為Her2陽性。

由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考值，用于對(duì)患者結(jié)果進(jìn)行診斷評(píng)估。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

如樣品中的Her2含量低于臨界值（15.0?ng/mL），則表明Her2濃度在正常范圍；本試劑盒用于檢測(cè)乳癌期患者的Her2濃度，對(duì)于Her2濃度大于15.0?ng/mL的患者應(yīng)進(jìn)行多次檢測(cè)，進(jìn)行趨勢(shì)分析，如果變化值大于或等于15%的增長(zhǎng)認(rèn)為是疾病有加重進(jìn)展的趨勢(shì)，增長(zhǎng)小于15%則顯示疾病無進(jìn)展趨勢(shì)。本試劑盒的測(cè)定結(jié)果僅是患者總體臨床評(píng)估的一部分，還要結(jié)合臨床其它診斷程序和信息進(jìn)行乳腺癌管理。

如果樣品Her2的含量不在本試劑盒校準(zhǔn)品的線性范圍內(nèi)，則根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。本試劑盒在0.16-20?ng/mL區(qū)間內(nèi)未見倒鉤效應(yīng)。因臨床樣品需要稀釋5或20倍后檢測(cè)，所以臨床樣品的檢測(cè)范圍為0.78-100?ng/mL或3.3-400?ng/mL之間，對(duì)于濃度大于和等于100或400?ng/mL的樣品，應(yīng)對(duì)樣品做進(jìn)一步稀釋后再測(cè)定。產(chǎn)品質(zhì)控應(yīng)在靶值范圍內(nèi)。

【檢驗(yàn)方法的局限性】

Her2/neu蛋白由細(xì)胞質(zhì)區(qū)、跨膜區(qū)和細(xì)胞外區(qū)（ECD）組成。有報(bào)道ECD在正常個(gè)體的血清中存在，在部分乳癌轉(zhuǎn)移婦女的血清中濃度升高9-11。而且另有報(bào)道Her2/neu蛋白在很多起源于上皮的其它類型腫瘤如肺、胰腺、結(jié)腸、胃、卵巢、子宮頸和膀胱等癌癥也有過度表達(dá)12-18。

Her2濃度不能作為惡性腫瘤早期診斷或確診依據(jù)。治療前，已確診乳腺癌的患者Her2濃度也常常在正常的濃度范圍之內(nèi)。此外，Her2濃度升高也會(huì)在非惡性疾病和非乳癌惡性疾病的患者中發(fā)現(xiàn)。

脂血(甘油三酯